Beta gliukanas

Taikymas ir principas

Taikymas ir principas This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

Reagentai ir tirpalai
Fosfatų buferis Ištirpinkite 13,6 g vienbazio kalio fosfato maždaug 1900 ml vandens, įpilkite 70% natrio hidroksido tirpalo, kol pH bus 6,5 ± 0,05, tada tirpalas supilamas į 2000 ml matavimo kolbą, praskiedžiamas iki žymės vandeniu ir sumaišyti.
Neokuproino tirpalas A 40,0 g bevandenio natrio karbonato, 16,0 g glicino ir 450 mg vario sulfato pentahidrato ištirpinkite maždaug 600 ml vandens. Tirpalas supilamas į 1000 ml matavimo kolbą, praskiedžiamas vandeniu iki žymės ir sumaišomas.
Neokuproino tirpalas B Ištirpinkite 600 mg neokuproino hidrochlorido maždaug 400 ml vandens, perpilkite tirpalą į 500 ml matavimo kolbą, atskieskite iki žymės vandeniu ir sumaišykite. Išmeskite, kai atsiranda geltona spalva.
Lichenino substratas 150 mg lichenino („Sigma Chemical Co.“, katalogo Nr. L-6133 arba lygiavertis) sumalkite į smulkius miltelius skiedinyje ir ištirpinkite maždaug 50 ml vandens maždaug 85 ° C temperatūroje. Kai tirpalas bus baigtas (20–30 min.), Įpilkite 90 mg natrio borohidrido ir toliau kaitinkite žemiau virimo temperatūros 1 valandą. Įpilkite 15 g „Amberlite MB-3“ arba lygiavertės jonų mainų dervos ir nuolat maišykite 30 min. Vakuuminiu būdu filtruokite per „Whatman No 1“ filtravimo popierių arba lygiavertį popierių Bächnerio piltuve ir nuplaukite popierių maždaug 20 ml vandens. Į filtratą įpilkite 680 mg vienbazio kalio fosfato ir vėl filtruokite per 0,22 µµm „Millipore“ filtro pagalvėlę arba lygiavertę medžiagą. Įklotą nuplaukite 10 ml vandens ir 1 N natrio hidroksidu arba 1 N druskos rūgštimi filtrato pH nustatykite iki 6,5 ± 0,05. Filtratas supilamas į 100 ml matavimo kolbą, praskiedžiamas vandeniu iki žymės ir sumaišomas. Laikykite nuo 2 ° iki 4 ° ° ne ilgiau kaip 3 dienas.
Standartinis gliukozės tirpalas 36,0 mg bevandenės dekstrozės ištirpinkite fosfato buferyje 1000 ml matavimo kolboje, atskieskite iki žymės vandeniu ir sumaišykite.
Tiriamasis preparatas Paruoškite tirpalą iš fermento paruošimo mėginio taip, kad 1 ml galutinio praskiedimo būtų nuo 0,01 iki 0,02 beta gliukano vienetų. Mėginys pasveriamas, supilamas į tinkamo dydžio matavimo kolbą, praskiedžiamas iki žymės fosfato buferiu ir sumaišomas.

Procedūra
Į kiekvieną iš keturių atskirų mėgintuvėlių, sugraduotų po 25 ml, pipete įpilkite 2 ml kerpių substrato ir 10–15 minučių mėgintuvėlius pašildykite vandens vonelėje 40 ° C temperatūroje.
Po pusiausvyros į 1 mėgintuvėlį (substrato tuščias) įpilkite 1 ml fosfato buferio, 2 mėgintuvėlyje - 1 ml standartinio gliukozės tirpalo (gliukozės etalonas), 4 ml neokuproino A tirpalo ir 1 ml bandomojo preparato į 3 mėgintuvėlį (fermento tuščiasis tirpalas). ) ir 1 ml bandomojo preparato į 4 mėgintuvėlį (mėginys). Paruoškite penktąjį mėgintuvėlį tuščiajam buferiui ir įpilkite 3 ml fosfato buferio.
Inkubuokite penkis mėgintuvėlius 40 ° temperatūroje tiksliai 15 min., Tada į 1, 2, 4 ir 5 mėgintuvėlius įpilkite 4 ml Neokuproino tirpalo A. Į visus penkis mėgintuvėlius įpilkite 4 ml Neokuproino tirpalo B ir uždėkite tinkamu dangteliu. dydžio stiklo marmuras.
[DĖMESIO: nenaudokite guminių kamščių. ]
Mėgintuvėliai kaitinami intensyviai verdančio vandens vonioje tiksliai 12 minučių, kad atsirastų spalva, tada atvėsinkite iki kambario temperatūros šaltame vandenyje ir kiekvieno vandens tūrį sureguliuokite 25 ml. Mėgintuvėlius uždarykite „Parafilm“ ar kitu tinkamu dangteliu ir kelis kartus sumaišykite.
Kiekvieno tirpalo absorbcija, esant 1 nm ląstelėse esant 450 nm, naudojant tinkamą spektrofotometrą, nustatoma 5 mėgintuvėlio buferio tuščiajai medžiagai.

Skaičiavimas
Vienas beta gliukano vienetas (BGU) apibrėžiamas kaip tas fermento kiekis, kuris tyrimo sąlygomis išskirs redukuojantį cukrų (kaip gliukozės ekvivalentą) 1 µmol / min greičiu.
Apskaičiuokite analizei paimto fermento preparato aktyvumą taip:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 × 15 × µg mėginio]

kurioje A4 yra mėginio absorbcija (4 mėgintuvėlis), A3 yra fermento ruošinio absorbcija (3 mėgintuvėlis), A2 yra gliukozės etalono absorbcija (2 mėgintuvėlis), A1 yra substrato ruošinio absorbcija (mėgintuvėlis) 1), 36 yra mikrogramai gliukozės gliukozės etaloniniame tirpale, 106 yra faktorius, konvertuojantis mikrogramus į gramus, 180 yra 1 µmol gliukozės svoris, o 15 - reakcijos laikas minutėmis.

ANALIZĖS SERTIFIKATAS

* Aukščiau pateikta informacija yra tiesioginis šios produkto gamintojo „Newgen Biotech“ pateiktos informacijos vertimas. Šis analizės sertifikatas turėtų būti naudojamas informaciniais tikslais ir nėra skirtas pakaitalui atlikti griežtą šio produkto pirkėjo kokybės kontrolės analizę.

Pakavimas ir sandėliavimas

Kietas maisto pakavimo maišas, 25 kg / statinė.

Laikyti sausose, vėsiose ir gerai vėdinamose vietose nuo saulės, karščio.

Apmokėjimas:T / T, „Paypal“, „Western Union“, „Alibaba Trade Assurance“, „VISA“, „MasterCard“, el. Patikrinimas, mokėjimas vėliau, LC ir kt.